Komplet multiplex PCR v realnem času za novi koronavirus (SARS-CoV-2)
Ta zelo občutljiv komplet za PCR, pripravljen za uporabo, je na voljo v liofilizirani obliki (postopek zamrzovalnega sušenja) za dolgoročno shranjevanje. Komplet lahko prevažate in shranjujete pri sobni temperaturi in je stabilen eno leto. Vsaka epruveta premiksa vsebuje vse reagente, potrebne za pomnožitev s PCR, vključno z reverzno transkriptazo, Taq polimerazo, primerji, sondami in substrati dNTP. Dodati je treba le 13 ul destilirane vode in 5 ul ekstrahirane predloge RNA, nato jo lahko zaženemo in ojačimo na instrumentih PCR.
Naprava qPCR mora izpolnjevati naslednje zahteve:
1. Namestite 8-palčno epruveto s prostornino 0,2 ml
2. imeti več kot štiri kanale za odkrivanje:
Kanal |
Vzbujanje (nm) |
Emisija (nm) |
Predkalibrirana barvila |
1. |
470 |
525 |
FAM, SYBR Zelena I |
2 |
523 |
564 |
VIC, HEX, TET, JOE |
3. |
571 |
621 |
ROX, TEXAS-RDEČA |
4 |
630 |
670 |
CY5 |
PCR platforme:
7500 Real-Time PCR sistem, Biorad CF96, iCycler iQ ™ Real-Time sistem za zaznavanje PCR, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
Težavnost hladnega verižnega transporta reagenta za odkrivanje nukleinske kisline Coronavirus
Kadar se običajni reagenti za odkrivanje nukleinske kisline prevažajo na velike razdalje, je treba (-20 ± 5) storage shranjevanje in prevoz hladne verige zagotoviti, da bioaktivni encim v reagentih ostane aktiven. Da bi zagotovili, da temperatura doseže standard, je za vsako škatlo reagenta za preskušanje nukleinske kisline, ki je manj kot 50 g, potrebnih več kilogramov suhega ledu, vendar lahko traja le dva ali tri dni. Glede na industrijsko prakso je dejanska teža reagentov, ki jih izdajo proizvajalci, manjša od 10% (ali veliko manjša od te vrednosti) posode. Večina teže prihaja iz suhega ledu, ledenih plošč in škatel s peno, zato so stroški prevoza izjemno visoki.
Marca 2020 je COVID-19 začel v velikem obsegu izginjati v tujini, povpraševanje po reagentu za odkrivanje nukleinske kisline Novel Coronavirus pa se je močno povečalo. Kljub visokim stroškom izvoza reagentov v hladni verigi jih večina proizvajalcev še vedno lahko sprejme zaradi velike količine in velikega dobička.
Vendar se z izboljšanjem nacionalne izvozne politike protipandemičnih izdelkov in nadgradnjo nacionalnega nadzora nad pretokom ljudi in logistiko pojavlja podaljšanje in negotovost v času prevoza reagentov, kar je povzročilo vidne težave z izdelki, s prevozom. Podaljšani čas prevoza (čas prevoza približno pol meseca je zelo pogost) pripelje do pogostih okvar izdelka, ko izdelek pride do stranke. To je vznemirilo večino izvoznikov reagentov za nukleinske kisline.
Liofilizirana tehnologija za reagent PCR je pomagala pri transportu reagenta za odkrivanje nukleinske kisline Novel Coronavirus po vsem svetu
Liofilizirane PCR reagente lahko prevažamo in shranjujemo pri sobni temperaturi, kar lahko ne samo zmanjša stroške prevoza, temveč tudi prepreči težave s kakovostjo, ki jih povzroča transportni postopek. Zato je liofilizacija reagenta najboljši način za reševanje problema izvoza.
Liofilizacija vključuje zamrznitev raztopine v trdno stanje, nato pa sublimiramo in ločimo vodno paro v vakuumskih pogojih. Posušena topljena tekočina ostane v posodi z enako sestavo in aktivnostjo. V primerjavi s konvencionalnimi tekočimi reagenti ima polnomponentni liofilizirani reagent za odkrivanje nukleinske kisline Novel Coronavirus, ki ga proizvaja Liming Bio, naslednje značilnosti:
Izredno močna toplotna stabilnost: lahko obdeluje 60 dni pri 56 ℃, morfologija in lastnosti reagenta pa ostaneta nespremenjeni.
Shranjevanje in prevoz pri normalni temperaturi: ni potrebe po hladni verigi, pred odpečatenjem ni treba shraniti pri nizki temperaturi, hladilni prostor popolnoma sprostite.
Pripravljeno za uporabo: liofilizacija vseh komponent, ni potrebe po konfiguraciji sistema, da se prepreči izguba komponent z visoko viskoznostjo, kot je encim.
Multipleksni cilji v eni cevi: cilj zaznavanja zajema nov gen za koronavirus ORF1ab, gen N in gen S, da se prepreči genovariranje virusa. Za zmanjšanje lažno negativnega se človeški gen RNaze P uporablja kot notranji nadzor, da se zadovolji klinična potreba po nadzoru kakovosti vzorca.