En svet en boj
─Mednarodno sodelovanje za izgradnjo globalne skupnosti skupne usode, ki se odzove na izziv pandemije COVID-19
Novi koronavirus, ki je zajel po vsem svetu, je povzročil stalno svetovno pandemično krizo COVID-19.Novi koronavirus nima meja, nobena država ne bo prizanesena tega boja proti COVID-19.Kot odgovor na to svetovno pandemijo COVID-19 Liming Bio-Products Corp prispeva k podpori blaginje naših globalnih skupnosti.
Naš svet se trenutno sooča z izjemnim vplivom pandemije nove koronavirusne bolezni 2019 (COVID-19).Do danes ni učinkovitega zdravila za zdravljenje te bolezni.Vendar pa je bilo razvitih veliko diagnostičnih testov za odkrivanje COVID-19.Ti testi temeljijo na molekularnih ali seroloških metodah za odkrivanje novih biomarkerjev nukleinske kisline ali protiteles, specifičnih za koronavirus.Ker je COVID-19 dosegel status pandemije, je zgodnja diagnoza nove okužbe s koronavirusom ključnega pomena za oceno širjenja virusa in njegovo zajezitev, vendar popoln test za univerzalno uporabo še ne obstaja.Vedeti moramo, katere teste bi lahko uporabili za presejanje, diagnozo in spremljanje okužbe s COVID-19 ter kakšne so njihove omejitve.Zelo pomembno je, kako bolje uporabiti ta znanstvena orodja in pomagati prepoznati in nadzorovati nastanek te hitro širitvene in resne bolezni.
Namen odkrivanja novega koronavirusa je ugotoviti, ali ima posameznik, ki ima okužbo s COVID-19, ali asimptotični nosilec, ki lahko tiho širi virus, zagotoviti bistvene informacije za usmerjanje odločanja o kliničnem zdravljenju.Prejšnje študije so pokazale, da je 70 % kliničnih odločitev odvisnih od rezultatov testiranja.Kadar se uporabljajo različne metode odkrivanja, so tudi zahteve kompletov reagentov za detekcijo različne.
Slika 1
Slika 1:Diagram, ki prikazuje ključne stopnje splošnih ravni biomarkerjev med tipičnim časovnim potekom okužbe s COVID-19.Os X označuje število dni okužbe, os Y pa virusno obremenitev, koncentracijo antigenov in koncentracijo protiteles v različnih obdobjih.Protitelesa se nanašajo na protitelesa IgM in IgG.Tako RT-PCR kot odkrivanje antigena se uporabljata za odkrivanje prisotnosti ali odsotnosti novega koronavirusa, kar je neposreden dokaz za zgodnje odkrivanje bolnikov.V enem tednu po virusni okužbi je prednostno odkrivanje s PCR ali odkrivanje antigena.Po približno 7 dneh okužbe z novim koronavirusom se je protitelo IgM proti novemu koronavirusu v bolnikovi krvi postopoma povečalo, vendar je trajanje obstoja kratko in njegova koncentracija hitro upada.Nasprotno pa se protitelo IgG proti virusu pojavi kasneje, običajno približno 14 dni po okužbi z virusom.Koncentracija IgG se postopoma povečuje in v krvi ostane dolgo časa.Torej, če je IgM odkrit v pacientovi krvi, to pomeni, da se je virus nedavno okužil, kar je zgodnji označevalec okužbe.Ko se v pacientovi krvi odkrije protitelo IgG, to pomeni, da je virusna okužba prisotna že nekaj časa.Imenuje se tudi pozna okužba ali predhodna okužba.Pogosto ga opazimo pri bolnikih, ki so v fazi okrevanja.
Biomarkerji novega koronavirusa
Novi koronavirus je virus RNA, ki je sestavljen iz beljakovin in nukleinskih kislin.Virus vdre v gostiteljsko (človeško) telo, vstopi v celice preko veznega mesta, ki ustreza receptorju ACE2, in se razmnožuje v gostiteljskih celicah, kar povzroči, da se človeški imunski sistem odzove na tuje napadalce in proizvede specifična protitelesa.Zato se lahko nukleinske kisline in antigeni viale ter specifična protitelesa proti novemu koronavirusu teoretično uporabljajo kot specifični biomarkerji za odkrivanje novega koronavirusa.Za odkrivanje nukleinskih kislin se najpogosteje uporablja tehnologija RT-PCR, medtem ko se za odkrivanje novih protiteles, specifičnih za koronavirus, običajno uporabljajo serološke metode.Trenutno so na voljo različne testne metode, ki jih lahko izberemo za testiranje okužbe s COVID-19 [1].
Osnovna načela glavnih testnih metod za nov koronavirus
Zaenkrat je na voljo veliko diagnostičnih testov za COVID_19, pri čemer je vsak dan odobreno več testnih kompletov v skladu z dovoljenjem za uporabo v sili.Čeprav se novi testi pojavljajo s toliko različnimi imeni in oblikami, se vsi trenutni testi COVID_19 v bistvu zanašajo na dve glavni tehnologiji: odkrivanje nukleinske kisline za virusno RNA in serološke imunske teste, ki odkrivajo virusno specifična protitelesa (IgM in IgG).
01. Odkrivanje nukleinske kisline
Verižna reakcija z reverzno transkripcijo s polimerazo (RT-PCR), izotermična amplifikacija, posredovana z zanko (LAMP), in sekvenciranje naslednje generacije (NGS) so običajne metode nukleinskih kislin za odkrivanje nove RNA koronavirusa.RT-PCR je prva vrsta testa za COVID-19, ki ga priporočata tako Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) kot ameriški center za nadzor in preprečevanje bolezni (CDC).
02.Serološko odkrivanje protiteles
Protitelo je zaščitna beljakovina, ki nastane v človeškem telesu kot odziv na okužbo z virusom.IgM je zgodnja vrsta protiteles, medtem ko je IgG poznejša vrsta protiteles.Vzorec seruma ali plazme se običajno pregleda na prisotnost specifičnih tipov IgM in IgG protiteles za oceno akutne in rekonvalescentne faze okužbe s COVID-19.Te metode odkrivanja, ki temeljijo na protitelesih, vključujejo imunokromatografijo s koloidnim zlatom, imunokromatografijo z lateksom ali fluorescentnimi mikrosferami, encimsko vezan imunosorbentni test (ELISA) in kemiluminiscenčni test.
03. Odkrivanje virusnega antigena
Antigen je struktura na virusu, ki jo prepozna človeško telo in ki sproži imunski obrambni sistem, da proizvede protitelesa za odstranitev virusa iz krvi in tkiv.Virusni antigen, ki je prisoten na virusu, je mogoče ciljati in odkriti z uporabo imunskega testa.Tako kot virusna RNA so tudi virusni antigeni prisotni v dihalnih poteh okuženih posameznikov in se lahko uporabljajo za diagnosticiranje akutne faze okužbe s COVID-19.Zato se pogosto priporoča odvzem vzorcev zgornjih dihal, kot so slina, brisi iz nosu in žrela, izpljunek globokega kašlja, tekočina iz bronhoalveolarnega izpiranja (BALF) za začetno testiranje na antigen.
Izbira metod testiranja za nov koronavirus
Izbira metode testiranja vključuje številne dejavnike, vključno s kliničnimi nastavitvami, kontrolo kakovosti testiranja, časom, stroški testiranja, metodami zbiranja vzorcev, tehničnimi zahtevami za laboratorijsko osebje, zahtevami glede objektov in opreme.Odkrivanje nukleinskih kislin ali virusnih antigenov je zagotoviti neposreden dokaz o prisotnosti virusov in potrditi diagnozo nove okužbe s koronavirusom.Čeprav obstaja veliko metod za odkrivanje antigenov, je njihova občutljivost za odkrivanje novega koronavirusa teoretično nižja kot pri RT-PCR amplifikacije.Testiranje protiteles je odkrivanje protivirusnih protiteles, proizvedenih v človeškem telesu, ki zaostajajo v času in ga pogosto ni mogoče uporabiti za zgodnje odkrivanje v akutni fazi virusne okužbe.Klinične nastavitve za aplikacije za odkrivanje se lahko razlikujejo, prav tako so lahko različna mesta za zbiranje vzorcev.Za odkrivanje virusnih nukleinskih kislin in antigenov je treba vzorec odvzeti v dihalnih poteh, kjer je virus prisoten, kot so brisi nazofarinksa, brisi orofarinksa, sputum ali tekočina iz bronhoalveolarne lavaže (BALF).Za odkrivanje na podlagi protiteles je treba odvzeti vzorec krvi in ga pregledati glede prisotnosti specifičnih protivirusnih protiteles (IgM/IgG).Vendar pa se rezultati testov protiteles in nukleinske kisline lahko dopolnjujejo.Na primer, če je rezultat testiranja negativen na nukleinsko kislino, negativen na IgM, a na IgG pozitiven, ti rezultati kažejo, da bolnik trenutno ne nosi virusa, ampak je ozdravel po novi okužbi s koronavirusom.[2]
Prednosti in slabosti novih testov na koronavirus
V Protokolu za diagnozo in zdravljenje nove pljučnice s koronavirusom (preizkusna različica 7) (ki sta jo izdala Nacionalna zdravstvena komisija in državna uprava za tradicionalno kitajsko medicino 3. marca 2020) se testiranje nukleinske kisline uporablja kot zlati standard za diagnozo novega. okužbo s koronavirusom, medtem ko se testiranje na protitelesa šteje tudi za eno od potrditvenih metod za diagnozo.
Patogene in serološke ugotovitve
(1) Patogene ugotovitve: Novo nukleinsko kislino koronavirusa je mogoče odkriti v brisu nazofarinksa, sputumu, izločkih spodnjih dihal, krvi, blatu in drugih vzorcih z uporabo RT-PCRand/ali NGS metod.Natančneje je, če so vzorci pridobljeni iz spodnjih dihalnih poti (izpljunka ali ekstrakcija zračnih poti).Vzorce je treba oddati v testiranje čim prej po odvzemu.
(2) Serološki izvidi: IgM, specifični za virus NCP, postane zaznan približno 3-5 dni po pojavu;IgG doseže titracijo vsaj 4-kratnega povečanja med rekonvalescenco v primerjavi z akutno fazo.
Vendar pa je izbira metod testiranja odvisna od geografskih lokacij, zdravstvenih predpisov in kliničnih okolij.V ZDA je NIH izdal smernice za zdravljenje koronavirusne bolezni 2019 (COVID-19) (spletišče posodobljeno: 21. aprila 2020), FDA pa je izdala Politiko za diagnostične teste za koronavirusno bolezen-2019 med izrednimi razmerami na področju javnega zdravja (izdana 16. marca 2020). ), pri katerem je serološko testiranje protiteles IgM/IgG izbrano le kot presejalni test.
Metoda odkrivanja nukleinske kisline
RT_PCR je zelo občutljiv test nukleinske kisline, namenjen ugotavljanju, ali je nova RNA koronavirusa prisotna v dihalnem ali drugem vzorcu.Pozitiven rezultat PCR testa pomeni prisotnost nove RNA koronavirusa v vzorcu za potrditev okužbe s COVID-19.Negativen rezultat PCR testa ne pomeni odsotnosti virusne okužbe, ker bi nanjo lahko vplivala slaba kakovost vzorca ali čas bolezni v fazi okrevanja itd.Čeprav je RT-PCR zelo občutljiv test, ima številne pomanjkljivosti.RT-PCR testi so lahko delovno intenzivni in dolgotrajni, kar je bistveno odvisno od visoke kakovosti vzorca.To je lahko izziv, ker se količina virusne RNA ne samo zelo razlikuje med različnimi bolniki, ampak se lahko razlikuje tudi znotraj istega bolnika, odvisno od časovnih točk, ko je vzorec odvzet, pa tudi od faz okužbe ali pojava kliničnih simptomov.Za odkrivanje novega koronavirusa so potrebni visokokakovostni vzorci, ki vsebujejo zadostno količino nedotaknjene virusne RNA.
Test RT-PCR lahko pri nekaterih bolnikih, ki imajo okužbo s COVID-19, da napačen negativen rezultat (lažno negativen).Kot vemo, se glavna mesta okužbe z novim koronavirusom nahajajo v pljučih in spodnjih dihalnih poteh, kot so alveoli in bronhi.Zato se šteje, da ima vzorec izpljunka iz globokega kašlja ali bronhoalveolarno izpiranje (BALF) največjo občutljivost za odkrivanje virusa.Vendar pa se v klinični praksi pogosto zbirajo vzorce iz zgornjih dihalnih poti z uporabo nazofaringealnih ali orofaringealnih brisov.Zbiranje teh vzorcev ni le neprijetno za bolnike, ampak zahteva tudi posebej usposobljeno osebje.Da bi bilo vzorčenje manj invazivno ali lažje, lahko v nekaterih primerih bolnikom damo ustni bris in jim omogočimo, da sami vzamejo vzorec iz ustne sluznice ali bris jezika.Brez zadostne virusne RNA lahko RT-qPCR vrne lažno negativen rezultat testa.V provinci Hubei na Kitajskem so poročali o občutljivosti RT-PCR pri začetnem odkrivanju le okoli 30 % -50 %, v povprečju pa 40 %.Visoka stopnja lažno negativnih je bila najverjetneje posledica nezadostnega vzorčenja.
Poleg tega test RT-PCR zahteva visoko usposobljeno osebje za izvajanje zapletenih korakov ekstrakcije RNA in postopka pomnoževanja PCR.Zahteva tudi višjo raven zaščite biološke varnosti, posebno laboratorijsko opremo in instrument PCR v realnem času.Na Kitajskem je treba test RT-PCR za odkrivanje COVID-19 opraviti v laboratorijih stopnje biološke varnosti 2 (BSL-2), pri čemer je treba osebje zaščititi z uporabo prakse stopnje biološke varnosti 3 (BSL-3).V skladu s temi zahtevami je od začetka januarja do začetka februarja 2020 zmogljivost laboratorija CDC v China Wuhanu lahko odkrila le nekaj sto primerov na dan.Običajno to ne bi bil problem pri testiranju drugih nalezljivih bolezni.Vendar pa pri obravnavanju globalne pandemije, kot je COVID-19, pri kateri se lahko testirajo milijoni ljudi, postane RT-PCR kritična težava zaradi zahtev po posebnih laboratorijskih zmogljivostih ali tehnični opremi.Te pomanjkljivosti lahko omejijo uporabo RT-PCR kot učinkovitega orodja za presejanje in lahko povzročijo zamude pri poročilih o rezultatih testiranja.
Serološka metoda odkrivanja protiteles
Z napredovanjem poteka bolezni, zlasti v srednjih in poznih fazah, je stopnja odkrivanja protiteles zelo visoka.Študija v osrednji južni bolnišnici Wuhan je pokazala, da bi lahko stopnja odkrivanja protiteles v tretjem tednu okužbe s COVID-19 dosegla več kot 90 %.Protitelo je tudi produkt človeškega imunskega odziva proti novemu koronavirusu.Test protiteles ima več prednosti pred RT-PCR.Prvič, serološki testi protiteles so preprosti in hitri.Preskusi stranskega pretoka protiteles se lahko uporabijo na mestu oskrbe, da dobimo rezultat v 15 minutah.Drugič, tarča, ki jo odkrije serološki test, je protitelo, za katero je znano, da je veliko bolj stabilno kot virusna RNA.Med zbiranjem, transportom, shranjevanjem in testiranjem so vzorci za teste protiteles na splošno bolj stabilni kot vzorci za RT-PCR.Tretjič, ker je protitelo enakomerno porazdeljeno v krvni obtok, je v primerjavi s testom nukleinske kisline manj variacij vzorčenja.Volumen vzorca, potreben za test protiteles, je relativno majhen.Na primer, 10 mikrolitrov krvi iz prstnega vboda zadostuje za uporabo pri testu bočnega pretoka protiteles.
Na splošno je test protiteles izbran kot dopolnilno orodje za odkrivanje nukleinskih kislin za izboljšanje stopnje odkrivanja novega koronavirusa med potekom bolezni.Če se test protiteles uporablja skupaj s testom nukleinske kisline, lahko poveča natančnost testa za diagnozo COVID19 z zmanjšanjem možnih lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov.Trenutni priročnik za uporabo ne priporoča uporabe dveh vrst testov ločeno kot neodvisnega formata za odkrivanje, temveč ga je treba uporabiti kot kombinirano obliko.[2]
Slika 2:Pravilna interpretacija rezultatov testov nukleinske kisline in protiteles za odkrivanje nove okužbe s koronavirusom
Slika 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Komplet za dvojni hitri test protiteles IgM/IgG proti novim koronavirusom (StrongStep®Hitri test protiteles IgM/IgG SARS-CoV-2, imunokromatografija iz lateksa)
Slika 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Multipleksni komplet za PCR v realnem času za nov koronavirus (SARS-CoV-2) (detekcija za tri gene, metoda fluorescenčne sonde).
Opomba:Ta zelo občutljiv komplet za PCR, pripravljen za uporabo, je na voljo v liofilizirani obliki (postopek sušenja z zamrzovanjem) za dolgotrajno shranjevanje.Komplet je mogoče prevažati in hraniti pri sobni temperaturi in je stabilen eno leto.Vsaka epruveta premiksa vsebuje vse reagente, potrebne za pomnoževanje PCR, vključno z reverzno transkriptazo, Taq polimerazo, primerji, sondami in substrati dNTP. Uporabniki lahko preprosto rekonstituirajo mešanico z dodajanjem vode, ki je primerna za PCR, skupaj s predlogo in nato naloži na instrument PCR za izvedbo amplifikacije.
Kot odgovor na izbruh novega koronavirusa je Liming Bio-Products Co., Ltd. hitro delal na razvoju dveh diagnostičnih kompletov, ki bi kliničnim in javnim zdravstvenim laboratorijem omogočila hitro diagnosticiranje okužbe s COVID-19.Ti kompleti so zelo primerni za uporabo za obsežno presejanje v državah in regijah, kjer se novi izbruh koronavirusa hitro širi, ter za zagotavljanje diagnoze in potrditev okužbe s COVID-19.Ti kompleti so za uporabo samo pod predhodno obveščenim dovoljenjem za uporabo v sili (PEUA).Testiranje je omejeno na laboratorije, certificirane v skladu s predpisi nacionalnih ali lokalnih oblasti.
Metoda odkrivanja antigena
1. Odkrivanje virusnega antigena je razvrščeno v isto kategorijo neposredne detekcije kot odkrivanje nukleinske kisline.Te metode neposrednega odkrivanja iščejo dokaze o virusnih patogenih v vzorcu in se lahko uporabijo za potrditev diagnoze.Vendar pa razvoj kompletov za odkrivanje antigenov zahteva visoko kakovost monoklonskih protiteles z močno afiniteto in visoko občutljivostjo, ki so sposobna prepoznati in ujeti patogene viruse.Običajno traja več kot šest mesecev, da izberemo in optimiziramo monoklonsko protitelo, primerno za uporabo pri pripravi kompleta za odkrivanje antigena.
2. Trenutno so reagenti za neposredno odkrivanje novega koronavirusa še v fazi raziskav in razvoja.Zato noben komplet za odkrivanje antigenov ni bil klinično potrjen in komercialno na voljo.Čeprav je bilo predhodno poročano, da je diagnostično podjetje v Shenzhenu razvilo komplet za odkrivanje antigenov in ga klinično testiralo v Španiji, zanesljivosti in natančnosti testa ni bilo mogoče potrditi zaradi prisotnosti težav s kakovostjo reagenta.Do danes NMPA (nekdanja Kitajska FDA) še ni odobrila nobenega kompleta za odkrivanje antigenov za klinično uporabo.Skratka, razvite so bile različne metode odkrivanja.Vsaka metoda ima svoje prednosti in omejitve.Rezultati različnih metod se lahko uporabijo za preverjanje in dopolnjevanje.
3. Izdelava kakovostnega kompleta za testiranje COVID-19 je močno odvisna od optimizacije med raziskavami in razvojem.Liming Bio-Product Co., Ltd.testni kompleti morajo izpolnjevati stroge standarde proizvodnje in nadzora kakovosti, da zagotovijo najvišjo raven zmogljivosti in doslednosti.Znanstveniki pri Liming Bio-Product Co., Ltd. imajo več kot dvajset let izkušenj pri načrtovanju, testiranju in optimizaciji in vitro diagnostičnih kompletov, da bi zagotovili najvišjo raven učinkovitosti pri analizni kvantificiranju.
Med pandemijo COVID-19 se je kitajska vlada soočila z velikim povpraševanjem po materialih za preprečevanje epidemij na mednarodnih žariščih.5. aprila je na tiskovni konferenci skupnega mehanizma za preprečevanje in nadzor Državnega sveta "Krepitev upravljanja kakovosti medicinskih materialov in uravnavanje tržnega reda" Jiang Fan, inšpektor prve stopnje oddelka za zunanjo trgovino ministrstva. Commerce, je dejal: "Nato bomo svoja prizadevanja osredotočili na dva vidika, najprej na pospešitev podpore več medicinskih zalog, ki jih potrebuje mednarodna skupnost, in tudi na izboljšanje nadzora kakovosti, regulacije in upravljanja izdelkov. Prispevali bomo Kitajsko k skupnemu odzivu na svetovno epidemijo in izgradnji skupnosti s skupno prihodnostjo za človeštvo.
Slika 5:Novi reagent za koronavirus Liming Bio-Products Co., Ltd. je pridobil potrdilo o registraciji EU CE
Častna listina
Houshenshan
Slika 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. je podprlo gorsko bolnišnico Wuhan Vulcan(HouShenShan) v boju proti epidemiji COVID-19 in prejelo častno spričevalo Rdečega križa Wuhan.Gorska bolnišnica Wuhan Vulcan je najbolj znana bolnišnica na Kitajskem, ki je specializirana za zdravljenje hudih bolnikov s COVID-19.
Ker se novi izbruh koronavirusa še naprej širi po svetu, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. krepi podporo in pomoč skupnostim po vsem svetu z našimi inovativnimi tehnologijami za boj proti tej globalni grožnji brez primere.Hitro testiranje okužbe s COVID-19 je ključni del obravnave te grožnje.Še naprej pomembno prispevamo z zagotavljanjem visokokakovostnih diagnostičnih platform v roke zdravstvenih delavcev, da lahko ljudje prejmejo kritične rezultate testiranja, ki jih potrebujejo.Liming Bio-products Co., Ltd. si prizadeva v boju proti pandemiji COVID-19 prispevati naše tehnologije, izkušnje in strokovno znanje mednarodnim skupnostim za izgradnjo globalne skupnosti usode.
Dolgo pritisnite ~Skeniraj in sledi nam
E-naslov: sales@limingbio.com
Spletno mesto: https://limingbio.com
Čas objave: 1. maj 2020
