Katera je najboljša metoda?
— Testi za diagnozo okužbe s SARS-CoV-2
Za potrjene primere COVID-19, o katerih so poročali, pogosti klinični simptomi vključujejo zvišano telesno temperaturo, kašelj, mialgijo ali utrujenost.Vendar ti simptomi niso edinstveni znaki COVID-19, ker so podobni simptomom drugih bolezni, okuženih z virusom, kot je gripa.Trenutno so PCR v realnem času virusne nukleinske kisline (rt-PCR), CT slikanje in nekateri hematološki parametri glavna orodja za klinično diagnozo okužbe.Kitajski CDC je razvil in uporabljal številne laboratorijske testne komplete za testiranje vzorcev bolnikov za COVID-19.1, ameriški CDC2in druga zasebna podjetja.Test protiteles IgG/IgM, serološka testna metoda, je bil dodan tudi kot diagnostično merilo v kitajsko posodobljeno različico smernic za diagnozo in zdravljenje nove koronavirusne bolezni (COVID-19), ki je bila izdana 3. marca.1.Test rt-PCR virusne nukleinske kisline je še vedno trenutna standardna diagnostična metoda za diagnozo COVID-19.
StrongStep®Novel Coronavlrus (SARS-COV-2) Multipleksni komplet za PCR v realnem času (detekcija za tri gene)
Toda ti kompleti za testiranje PCR v realnem času, ki iščejo genski material virusa, na primer v brisu iz nosu, ust ali analnega brisov, trpijo zaradi številnih omejitev:
1) Ti testi imajo dolge čase in so zapleteni pri delovanju;na splošno trajajo v povprečju več kot 2 do 3 ure, da ustvarijo rezultate.
2) Za izvajanje PCR testov so potrebni certificirani laboratoriji, draga oprema in usposobljeni tehniki.
3) Obstaja nekaj lažno negativnih rezultatov za rt-PCR za COVID-19.Lahko je posledica nizke virusne obremenitve SARS-CoV-2 v vzorcu brisa zgornjih dihal (Novi koronavirus okuži predvsem spodnja dihala, kot so pljučne alveole) in test ne more identificirati ljudi, ki so bili okuženi, ozdraveli in odstranili virus iz svojih teles.
Raziskava Lirong Zou et al4ugotovili, da so bile višje virusne obremenitve odkrite kmalu po pojavu simptomov, pri čemer so bile večje virusne obremenitve odkrite v nosu kot v grlu in da je vzorec izločanja virusne nukleinske kisline pri bolnikih, okuženih s SARS-CoV-2, podoben tistemu pri bolnikih z gripo4in se zdi drugačen od tistega pri bolnikih, okuženih s SARS-CoV-2.
Yang Pan et al5pregledali so serijske vzorce (brisi žrela, sputum, urin in blato) dveh bolnikov v Pekingu in ugotovili, da je virusna obremenitev v brisu žrela in vzorcih izpljunka dosegla vrh približno 5–6 dni po pojavu simptomov, vzorci sputuma so na splošno pokazali višjo virusno obremenitev kot vzorci brisa žrela.V vzorcih urina ali blata teh dveh bolnikov niso odkrili virusne RNA.
Test PCR daje pozitiven rezultat le, če je virus še vedno prisoten.Testi ne morejo identificirati ljudi, ki so šli skozi okužbo, si opomogli in odstranili virus iz svojih teles.V resnici je bilo le približno 30-50% pozitivnih na PCR pri bolnikih s klinično diagnosticirano novo pljučnico s koronavirusom.Veliko bolnikov s pljučnico s koronavirusom zaradi negativnega testa nukleinske kisline ni mogoče diagnosticirati, zato ne morejo pravočasno dobiti ustreznega zdravljenja.Od prve do šeste izdaje smernic, ki se zanašajo samo na diagnozo rezultatov testov nukleinske kisline, kar je povzročilo velike težave zdravnikom. Najzgodnejši "žvižgač", dr. Li Wenliang, oftalmolog v Wuhan Central Bolnišnica, je mrtev.V življenju je imel tri teste nukleinske kisline v primeru vročine in kašlja, zadnjič pa je dobil PCR pozitivne rezultate.
Po razpravi strokovnjakov je bilo odločeno, da se metode testiranja seruma povečajo kot novo diagnostično merilo.Medtem ko testi na protitelesa, imenovani tudi serološki testi, lahko potrdijo, ali je bil nekdo okužen tudi po tem, ko je njegov imunski sistem odstranil virus, ki povzroča COVID-19.
StrongStep® SARS-COV-2 Hitri test protiteles IgG/IgM
Test protiteles IgG/IgM bo pomagal izslediti na veliko bolj populacijski način, kdo je imel okužbo, saj se zdi, da se številni primeri širijo od asimptomatskih bolnikov, ki jih ni mogoče zlahka prepoznati.Par v Singapurju, mož je bil pozitiven s PCR, rezultat PCR testa njegove žene je bil negativen, vendar so rezultati testa protiteles pokazali, da ima protitelesa tudi ona, tako kot njen mož.
Serološke teste je treba skrbno validirati, da se prepričamo, da se zanesljivo odzovejo, vendar le na protitelesa proti novemu virusu.Ena skrb je bila, da bi podobnost med virusi, ki povzročajo hudi akutni respiratorni sindrom, in COVID-19 lahko povzročila navzkrižno reaktivnost.IgG-IgM, ki ga je razvil Xue Feng wang6veljalo, da se lahko uporablja kot test na mestu oskrbe (POCT), saj se lahko izvaja v bližini postelje s krvjo iz prstov.Komplet ima občutljivost 88,66 % in specifičnost 90,63 %.Vendar pa so bili še vedno lažno pozitivni in lažno negativni rezultati.
V kitajski posodobljeni različici smernic za diagnozo in zdravljenje nove koronavirusne bolezni (COVID-19)1, potrjeni primeri so opredeljeni kot sumljivi primeri, ki izpolnjujejo eno od naslednjih meril:
(1) Vzorci dihalnih poti, vzorci krvi ali blata so bili pozitivni na nukleinsko kislino SARS-CoV-2 z uporabo rt-PCR;
(2) Gensko zaporedje virusa iz vzorcev dihalnih poti, krvi ali blata je zelo homologno z znanim SARS-CoV-2;
(3) Protitelesa IgM in IgG protitelesa IgM za novo coronavirus so bila pozitivna;
(4) Serumsko novo protitelo IgG, specifično za koronavirus, spremenjeno iz negativnega v pozitivno ali protitelesa IgG, specifično za koronavirus, je med obdobjem okrevanja 4-krat višja kot v akutnem obdobju.
Diagnoza in zdravljenje COVID-19
| Smernice | Objavljeno | Potrjena diagnostična merila |
| Različica 7 | 3. marca 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Različica 6 | 18. februar 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Referenca
1. Smernice za diagnosticiranje in zdravljenje nove pljučnice s koronavirusom (poskusna različica 7, Nacionalna zdravstvena komisija Ljudske republike Kitajske, izdana 3. marca 2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Raziskave uporabljajo samo protokol RT-PCR v realnem času za identifikacijo 2019-nCoV
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapur trdi, da je prvič uporabil test protiteles za sledenje okužbam s koronavirusom
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. Virusna obremenitev SARS-CoV-2 v vzorcih zgornjih dihal okuženih bolnikov 19. februar 2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Virusne količine SARS-CoV-2 v kliničnih vzorcih Lancet Infect Dis 2020 Objavljeno na spletu 24. februarja 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Razvoj in klinična uporaba hitrega testa kombiniranih protiteles IgM-IgG za SARS-CoV-2
Diagnoza okužbe XueFeng Wang ORCID ID: 0000-0001-8854-275X
Čas objave: 17. marec 2020
